手術(shù)室懸浮微生物的檢測

E.8.1  懸浮微生物的采樣裝置有以下兩類:

        1 采用無源采樣裝置，如培養(yǎng)皿。

        2 采用有源采樣裝置，如撞擊采樣器、離心采樣器、過濾采樣器。

E.8.2  空氣潔凈環(huán)境中懸浮微生物的靜態(tài)或空態(tài)檢測前，應(yīng)對各類表面進(jìn)行擦拭消毒，但不得對室內(nèi)空氣進(jìn)行蒸熏、噴灑之類的消毒。動態(tài)檢測均不得對表面和空氣進(jìn)行消毒。

E.8.3  沉降菌檢測應(yīng)符合下列要求：

        1 使用直徑90mm (Φ90)的培養(yǎng)皿采樣。當(dāng)采用其他直徑培養(yǎng)皿時，應(yīng)使其總面積和Φ90皿總面積相當(dāng)。

        2 培養(yǎng)皿中灌注胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基，必須留樣作陰性對照。

        3 培養(yǎng)皿表面應(yīng)經(jīng)適當(dāng)消毒清潔處理后，布置在有代表性的地點和氣流擾動極小的地點。在亂流潔凈室內(nèi)培養(yǎng)皿不應(yīng)布置在送風(fēng)口正下方。

        4 當(dāng)用戶沒有特定要求時，培養(yǎng)皿應(yīng)布置在地面及其以上0. 8m之內(nèi)的任意高度。

        5 每一間潔凈室或每一個控制區(qū)應(yīng)設(shè)1個陰性對照皿。

        6 動態(tài)監(jiān)測時也可協(xié)商布點位置和高度。

        7 培養(yǎng)皿數(shù)應(yīng)不少于微粒計數(shù)濃度的測點數(shù)，如工藝無特殊要求應(yīng)大于等于表E.8.3中的最少培養(yǎng)皿數(shù)，另外各加1個對照皿。

        8 當(dāng)延長沉降時間時，可按比例減少最少培養(yǎng)皿數(shù)，為防止脫水，最長沉降時間不宜超過1h，當(dāng)所需沉降時間超過1h, 可重疊多皿連續(xù)采樣。除非經(jīng)過驗證，證明更長的沉降時間可以基本按比例增加菌落數(shù)。

        9 培養(yǎng)皿應(yīng)從內(nèi)向外布置，從外向內(nèi)收皿。

        10 每布置完1個皿，皿蓋只允許斜放在皿邊上，對照皿蓋挪開即蓋上。

        11 布皿前和收皿后，均應(yīng)用雙層包裝保護(hù)培養(yǎng)皿，以防污染。

        12 收皿后皿應(yīng)倒置擺放，并應(yīng)及時放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，在培養(yǎng)箱外時間不宜超過2h。如無專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，對于檢測細(xì)菌總數(shù)，培養(yǎng)溫度采用（35?37）℃，培養(yǎng)時間為（24?48） h；對 于檢測真菌，培養(yǎng)溫度（27?29）℃，培養(yǎng)時間3d。

        13 布皿和收皿的檢測人員必須穿無菌服，但不得穿大褂。 頭、手均不得裸露，褲管應(yīng)塞在襪套內(nèi)，并不得穿拖鞋。

        14 對培養(yǎng)后的皿上菌落計數(shù)時，應(yīng)釆用5?10倍放大鏡查 看，若有2個或更多的菌落重疊，可分辨時則以2個或多個菌落計數(shù)。

        15 當(dāng)單皿菌落數(shù)太大受到質(zhì)疑時，可按以下原則之一進(jìn)行處理：

     1）作為壞點剔除；

     2）重測，如結(jié)果仍大，以兩次平均值為準(zhǔn)；如結(jié)果很小，可再重測；

     3）重測該處微粒濃度，參考此結(jié)果作出判斷。

     所有上述處理方法均應(yīng)記錄在案。

        16 每皿平均菌落數(shù)取到小數(shù)點后1位。

        17 動態(tài)監(jiān)測時每點疊放多個平皿或釆用可自動切換的儀器，每點應(yīng)采滿4h以上，每皿可采30min。當(dāng)只放1個皿時, 可少于4h，但不可少于1h。

E.8.4  浮游菌采樣應(yīng)符合下列要求:

        1 使用單級或多級撞擊式采樣器、離心采樣器或過濾釆樣器，采樣必須按所用儀器說明書的步驟進(jìn)行，特別要注意檢測之前對儀器消毒滅菌，并對培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基條做陰性對照。

        2 釆樣點數(shù)應(yīng)不少于微粒計數(shù)濃度測點數(shù)。

        3 釆樣點應(yīng)在離地0.8m高平面上均勻布置，或經(jīng)委托方 （用戶）與檢測方協(xié)商確定。亂流潔凈室內(nèi)不得在送風(fēng)口正下方布點。靜態(tài)或空態(tài)檢測前對室內(nèi)各種表面應(yīng)作擦拭消毒。

        4 每點采樣1次，如工藝無特殊要求，每次采樣量應(yīng)大于等于表E.8.4推薦的浮游菌最小采樣量。

        每次釆樣時間不宜超過15min，不應(yīng)超過30min。當(dāng)潔凈度很高，或預(yù)期含菌濃度可能很低時，釆樣量應(yīng)大于最小采樣量很多，以滿足減少計數(shù)誤差的要求。

        5 采樣器應(yīng)用支架固定，采樣時檢測人員應(yīng)退出，手持離心式釆樣器除外。檢測人員的穿戴同本附錄E. 8. 3條第15款。 必須手持采樣器時，應(yīng)將手臂伸直，站于下風(fēng)向。

        6  采樣后宜在2h之內(nèi)將釆樣器中的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基條送入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

        7 每點平均值取到小數(shù)點后1位。

        8 動態(tài)監(jiān)測的測點位置、數(shù)量和高度由工藝并經(jīng)協(xié)商確定。 每間潔凈室或每一個獨立受控環(huán)境中各點總采樣量，不分級別, 均應(yīng)大于1m。每點可用多臺采樣器。

        9 單點菌落數(shù)太大時應(yīng)按附錄E. 8. 3條第15款的原則處理。

E.8.5  表面染菌密度檢測應(yīng)符合下列要求：

        1 對于潔凈室內(nèi)圍護(hù)結(jié)構(gòu)、設(shè)備等表面的微生物采樣，應(yīng)采用無菌棉拭子擦抹法，當(dāng)表面很大，硬且平時，也可采用接觸皿法。

        2 用規(guī)格板標(biāo)定出面積為25cm²的區(qū)塊，對于圍護(hù)結(jié)構(gòu)，每面結(jié)構(gòu)不少于4塊，對于設(shè)備，每件不少于2塊，取樣地點均協(xié)商確定。

        3 將無菌棉拭于含1.0mL稀釋液試管中浸濕，于管壁上擠干后，對一區(qū)塊擦抹采樣，橫豎往返8次。每一區(qū)塊使用1根無菌棉拭。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原稀釋液試管中，經(jīng)電動混勻器震蕩20s或在手掌振打200次。

        4 取含菌液體1.0ml，以瓊脂灌注法接種平皿，每個樣本接種2個平皿，于（35?37）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（24?48） h后計數(shù)。

        5 必須將本次檢測所用的稀釋液、棉拭子、培養(yǎng)基等留樣作陰性比照。

        6 具體事項遵照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》執(zhí)行。

        7 對于適用接觸皿采樣的表面，以無菌操作方式，先將培養(yǎng)基注入硬質(zhì)或軟質(zhì)Φ55平皿，使培養(yǎng)基表面高出培養(yǎng)皿周邊, 測試時，將培養(yǎng)皿倒過來，使培養(yǎng)基表面均勻牢固地按壓住整個區(qū)域5s，不得有環(huán)形或線性的運動。

        8 對于圍護(hù)結(jié)構(gòu)，每面結(jié)構(gòu)應(yīng)用不少于4個培養(yǎng)皿按壓,，對于設(shè)備，每件用不少于2個培養(yǎng)皿按壓。

        9 按壓取樣后的培養(yǎng)皿，應(yīng)在2h之內(nèi)，于（35?37）°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（24?48） h后計數(shù)。

        10 菌數(shù)平均數(shù)取到小數(shù)點后1位。